表2 核苷类衍生物生物活性和毒性（a是HMVEC细胞、b是HEp-2细胞、c是Huh-7细胞）

从这里可以看出，1′-氰基化合物抗病毒活性好且细胞毒性小；1′-甲基化合物和1′-乙炔基化合物抗病毒活性消失；1′-氰基-2′-F化合物以及碱基换成鸟嘌呤抗病毒活性均消失。这些结果表明，化合物1在抗病毒活性和选择性上都呈现最优状态。

故研究者直接将化合物进行三磷酸化得到衍生物8，进一步测定其对病毒和人体RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)的生物活性。

表3 化合物8对RSV聚合酶、HCV聚合酶和人类聚合酶的抑制作用

注：SNI rate=single nucleotideincorporation rate（单核苷酸结合速率）

从这里也可以看出，化合物8对RSV聚合酶和HCV聚合酶具有较好的抑制活性，与化合物1的生物活性吻合。由于此时，并没有从埃博拉病毒中提取出聚合酶，所以通过测定细胞连续动态估算出化合物8对埃博拉病毒聚合酶的抑制活性与丙肝病毒聚合酶抑制活性相当（IC50≈5 μmol/L）。另外，化合物8对人体线粒体聚合酶和RNA/DNA多种聚合酶的抑制活性均较差（IC50>200 μmol/L），且向RNA单链中的参入很低，说明化合物8对病毒选择性高。

2.2 侧链修饰

由核苷类药物的抗病毒机理可知，核苷类药物参入到RNA链中抑制病毒复制，需要经过三磷酸化过程。其中第一次磷酸化是限速步骤，这一步对病毒的抑制作用强度影响最大，所以研究者将第一次磷酸化设定在戊糖的5′-位，既往研究均表明了这种方式的磷酸化有利于第二次磷酸化和第三次磷酸化的发生，从而发挥出抗病毒的活性。但是进行一次磷酸化后的产物含有两个负电荷，化合物的亲水性增强，不利于衍生物的跨膜转运和细胞内的传输。在研发抗丙肝药物索非布韦(9)时，研究者也遇到了类似的困境，但是将其制备成磷酰氨酸酯前药后，取得了重大突破，故此时研究者也参照了这种处理方式，制备了相应的磷酰氨酸酯前药，用于掩蔽负电荷的极性，设计合成了一系列化合物，并测定了衍生物对易感染埃博拉病毒(EBOV)、呼吸道多核体病毒(RSV)和丙肝病毒(HCV)细胞的半数抑制浓度EC50，同时也评价了这些化合物对正常细胞的半数抑制浓度CC50，作为初步安全性指标。

表4 核苷类衍生物生物活性和毒性（a是HMVEC细胞、b是HEp-2细胞、c是Huh-7细胞）

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